奶牛乳房炎5种致病菌多重PCR检测方法的建立与应用

作     者：王雪容 张宇 张海森 杨王浩 靳亚平 陈华涛 WANG Xue-rong;ZHANG Yu;ZHANG Hai-sen;YANG Wang-hao;JIN Ya-ping;CHEN Hua-tao

作者机构：西北农林科技大学动物医学院/农业农村部动物生物技术重点实验室陕西杨凌712100 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(32373088) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2025年第46卷第1期

页      码：48-55页

摘      要：为建立一种能快速检测奶牛乳房炎主要病原菌(大肠埃希氏菌、无乳链球菌、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌和肠炎沙门氏菌)的多重PCR检测方法,根据大肠埃希氏菌phoA基因、无乳链球菌ef-tu基因、肺炎克雷伯氏菌Khe基因、金黄色葡萄球菌Nuc基因和肠炎沙门氏菌invA基因设计特异性引物,优化PCR反应体系与反应程序并进行特异性试验,同时分别构建含病原菌基因的pMD-19T重组质粒进行灵敏性试验。结果显示,多重PCR反应的最适引物工作浓度为0.8μmol/L,最适退火温度为59.6℃,最佳延伸时间为40 s,最合适的循环数为30次;优化后的多重PCR反应体系可扩增出5种目标病原菌的特异性条带;5种病原菌PCR检测灵敏度可达到5 copies/μL。进一步利用该多重PCR反应体系对采集的108份乳房炎乳样进行检测,检测结果显示,108份样本的阳性检出率为77.8%,大肠埃希氏菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌和肠炎沙门氏菌的检出率分别为23.1%、8.3%、34.3%、8.3%、5.6%。结果表明,建立了一种具有良好特异性和灵敏性的多重PCR检测方法,在临床生产实践中可用于快速鉴定奶牛乳房炎的致病菌,为奶牛乳房炎的诊断、防控与流行病学调查提供了方法基础。

主 题 词：奶牛 乳房炎 病原菌 多重PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2025.01.008

馆 藏 号：203156283...