基于CRISPR/Cas9技术的SS18-SSX1阳性细胞模型的构建与验证

作     者：田娇 张乾儒 王宁 史奇 李亚 张琨岚 李锋 TIAN Jiao;ZHANG Qianru;WANG Ning;SHI Qi;LI Ya;ZHANG Kunlan;LI Feng

作者机构：石河子大学医学院新疆石河子832000 首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心北京100200 

基　　金：国家自然科学基金项目(82173057 82002846) 

出 版 物：《石河子大学学报(自然科学版)》 (Journal of Shihezi University(Natural Science))

年 卷 期：2025年第43卷第1期

页      码：8-15页

摘      要：目的 利用CRISPR/Cas9技术构建并验证SS18-SSX1^(+)-HEK293T细胞模型。方法 靶向SS18和SSX1分别设计sgRNA,构建Lentivirus-CRISPR v2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP一体化慢病毒载体,通过慢病毒转染和荧光流式分选技术筛选转入载体的HEK293T多克隆细胞,在多克隆细胞的基础上挑选SS18-SSX1阳性的单克隆细胞株,通过RT-PCR、Sanger测序和Western Blot验证SS18-SSX1^(+)-HEK293T单克隆细胞系构建成功。结果 成功构建了Lentivirus-CRISPR v2-SS18-gRNA-SSX1-gRNA-EGFP慢病毒载体;通过RT-PCR、Sanger测序和WB实验在178个HEK293T单克隆细胞中成功筛选并验证出1株SS18-SSX1阳性的单克隆细胞系。结论 利用CRISPR/Cas9技术成功构建SS18-SSX1融合基因阳性的HEK293T细胞系。

主 题 词：CRISPR/Cas9 滑膜肉瘤 SS18-SSX1 HEK293T细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13880/j.cnki.65-1174/n.2024.22.035

馆 藏 号：203156397...