Mabinlin基因分离与克隆中T－载体技术的应用

作     者：胡新文 郭建春 邵寒霜 李晓娟 郑学勤 

作者机构：中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室 

出 版 物：《热带作物学报》 (Chinese Journal of Tropical Crops)

年 卷 期：1995年第16卷第S1期

页      码：54-58页

摘      要：从采自云南屏边的马槟榔（ＣａｐｐａｒｉｓｍａｓａｉｋａｉＬｅｖｌ）叶片中分离提纯到ＤＮＡ，依据植物超甜蛋白Ｍａｂｉｎｌｉｎ的氨基酸序列，回译出Ｍａｂｉｎｌｉｎ的核苷酸序列，用简并密码子优先使用的原则和计算机ＤＮＡ系统分析，设计基因的上、下游引物，通过快速扩增得到Ｍａｂｉｎｌｉｎ基因的ＰＣＲ产物。用平末端内切酶ＥｃｏＲＶ和Ｓｍａｌ分别消化质粒Ｂｌｕｅｓｅｒｉｐｔ和Ｐｖｚ－１在标准缓冲液条件下，使用２ｍｍｏｌ／ＬｄＴＴＰ和Ｔａｑ多聚酶，７０℃温育２ｈ，反应中缺乏ｄＴＴＰ以外任何其它核苷酸均可导致线状载体３’端单－Ｔ的增加，此Ｔ－载体可用于Ｍａｂｉｎｌｉｎ基因的分离与克隆。其克隆效率比将ＰＣＲ扩增产物克隆到平末端载体上的效率高出１００倍以上。

主 题 词：马槟榔 植物超甜蛋白基因 T-载体 载体构建 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

核心收录：

馆 藏 号：203156428...