西番莲3种病毒多重RT-PCR检测方法的建立与应用

作     者：张莉娟 吴凤 黄婵婵 谢晋 李今朝 单彬 陆覃昱 ZHANG LiJuan;WU Feng;HUANG ChanChan;XIE Jin;LI JinZhao;SHAN Bin;LU QinYu

作者机构：广西壮族自治区亚热带作物研究所广西南宁530001 农业农村部农产品质量安全风险评估实验室(南宁)广西南宁530001 农业农村部亚热带果品蔬菜质量监督检验测试中心广西南宁530001 农业农村部亚热带果品蔬菜质量安全控制重点实验室广西南宁530001 

基　　金：广西农业科学院基本科研业务专项(桂农科2022YM14) 科技先锋队‘强农富民’‘六个一’专项行动(桂农科盟202316-1) 广西农业科学院科技发展基金项目(桂农科2022JM94) 

出 版 物：《农业研究与应用》 (Agricultural Research and Application)

年 卷 期：2024年第37卷第3期

页      码：198-206页

摘      要：【目的】西番莲是一种具有很高经济价值的热带和亚热带水果,但无性繁殖方式导致病毒病成为西番莲产业发展的严重威胁。为了更好地监控田间西番莲病毒病的发生,特开展本研究,以期建立针对西番莲夜来香花叶病毒(telosma mosaic virus,TeMV)、东亚西番莲病毒(East Asian passiflora virus,EAPV)和黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)的多重RT-PCR检测方法。【方法】根据已在GenBank上登记的3种病毒CP基因的保守序列,分别设计了针对TeMV、EAPV和CMV的3对特异性检测引物,通过试验确定了引物浓度、循环数、退火温度等条件,从而获得优化的多重RT-PCR反应体系,并验证了多重RTPCR的检测灵敏度,然后应用优化体系对广西田间采集的40个西番莲叶片样品进行3种病毒的检测。【结果】通过优化筛选,在20μL的PCR反应体系中实现了西番莲TeMV、EAPV、CMV 3种病毒的多重检测,最优反应条件是引物体积TeMV和EAPV各2μL、CMV3μL,循环数35次,退火温度54.9℃;验证结果表明,检测灵敏度最高可达10^(4)拷贝/μL。检测结果表明,3对特异性检测引物的扩增产物大小分别为496 bp、279 bp、157 bp。对西番莲叶片样品病毒进行检测的结果表明,TeMV、EAPV和CMV的检测结果分别是97.5%(39/40),95%(38/40)和2.5%(1/40),而用单一RT-PCR的检测结果分别是100%(40/40),95%(38/40)和2.5%(1/40),多重RT-PCR检测结果和单一RT-PCR检测结果的符合度为99.16%(119/120)。同时,TeMV和EAPV倾向于复合侵染,其复合侵染率高达95%(38/40)。【结论】本研究建立了西番莲病毒多重RT-PCR检测的优化体系,能够同时快速、灵敏和可靠地检测TeMV、EAPV和CMV,为这3种西番莲病毒田间控制、检疫规划和诊断提供了基础。

主 题 词：西番莲 TeMV EAPV CMV 多重RT-PCR 

学科分类：09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 090402[090402] 

D　O　I：10.20191/j.cnki.2095-0764.2024.03.002

馆 藏 号：203156503...