基于单管式LAMP-CRISPR/Cas12a技术的优化及其在甲型流感病毒检测性能的评估

作     者：汪雅婷 朱灿灿 尹雪儿 姚杰 王琴 WANG Yating;ZHU Cancan;YIN Xueer;YAO Jie;WANG Qin

作者机构：安徽医科大学第二附属医院检验科 中国科学院合肥物质科学研究院 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(项目号:82002189),题目:基于“电荷吸附”原理的病原体核酸快速富集及一体化检测新方法研究 安徽医科大学校科研基金资助项目(项目号:2021xkj032),题目:运动激活·BDNF/TrkB·通路机制研究及其联合CA125·对急性心梗后心衰发生的临床预测价值 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2025年第41卷第1期

页      码：6-15页

摘      要：环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification,LAMP）与将成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR/Cas12a）技术相结合，建立一种快速、准确、无污染的甲型流感病毒（Influenza A virus,IAV）的单管式检测方法（LAMP-CRISPR/Cas12a），并探讨其在临床诊断中的应用价值。设计并筛选最佳crRNA和LAMP引物，优化反应缓冲液、ssDNA reporter浓度以及CRISPR/Cas12a反应温度，建立单管式LAMP-CRISPR/Cas12a检测体系，并对该方法的灵敏度、特异性和临床实用性进行了评估。LAMP-CRISPR/Cas12a单管一步法可在45min内实现IAV的检测，灵敏度为10拷贝/μL，检测常见呼吸道病原体RSV-A、RSV-B、PIV3、IBV和SARS-CoV-2结果均为阴性，特异性良好；10例临床样本检测结果均与临床诊断结果相符，且LAMP-CRISPR/Cas12a与PCR法均一致。LAMP-CRISPR/Cas12a单管法检测IAV简便、快速、灵敏度高，且特异性强，无须开盖操作，避免了气溶胶污染，有望成为快速检测IAV的新方法。

主 题 词：环介导等温扩增 成簇的规律间隔的短回文重复序列 甲型流感病毒 体系优化 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004643

馆 藏 号：203156748...