基于CRISPR-Cas12a技术的呼吸道合胞病毒检测方法的建立

作     者：姚雪春 李磊 王志贤 盛长忠 ZHOU Zeqi TAN Cherie S YAO Xue-chun;LI Lei;WANG Zhi-xian;SHENG Chang-zhong;ZHOU Zeqi;TAN Cherie S

作者机构：天津大学医学工程与转化医学研究院天津300072 侵袭性真菌病机制研究与精准诊断北京市重点实验室丹娜生物分中心天津300467 天津市侵袭性真菌病精准诊断技术企业重点实验室天津300467 

基　　金：技术创新引导专项(22YDPYSY00120) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2025年第41卷第1期

页      码：103-109页

摘      要：【目的】呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术,建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩增(ERA)引物,筛选最佳扩增引物-crRNA组合建立检测体系;通过荧光法检测RSV核酸,确定检测方法的灵敏度及特异性。【结果】根据Cas12a的激活原理,针对A型及B型RSV分别设计合成RSV-crRNA1及RSV-crRNA2,二者混合加入检测体系,可同时检测到A型及B型RSV,并具有协同作用;实验筛选出一组最佳引物组合(RSV-F+RSV-R3J),最低检出限为5×10^(2) copies/mL,可在39℃恒温条件下,35 min内完成检测;该方法与其他核酸测试样本无交叉反应,只能检测出RSV核酸,具有较高的特异性。【结论】基于RT-ERA-CRISPR/Cas12a技术,成功建立了一种灵敏度高、特异性强、快速、低成本的RSV核酸检测方法,该方法不依赖复杂的检测仪器,任何能够提供恒温环境和检测荧光信号功能的仪器均可适用。因此,该方法适用于RSV即时检测,还可能应用于其他病原体感染的检测。

主 题 词：呼吸道合胞病毒 CRISPR-Cas12a技术 酶促重组等温扩增 即时检测 核酸检测 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-0433

馆 藏 号：203156952...