Cc10基因敲除小鼠模型的构建及气道炎症表型分析

作     者：龙洁 魏丹丹 吴全龙 赵子莹 张亚亚 陈艳焦 杨永清 徐玉东 LONG Jie;WEI Dandan;WU Quanlong;ZHAO Ziying;ZHANG Yaya;CHEN Yanjiao;YANG Yongqing;XU Yudong

作者机构：上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院上海200437 上海市针灸经络研究所上海200030 

基　　金：国家自然科学基金(批准号:81973952、82105013、82374583) 上海市自然科学基金(批准号:23ZR1459900)资助的课题 

出 版 物：《中国细胞生物学学报》 (Chinese Journal of Cell Biology)

年 卷 期：2025年第47卷第2期

页      码：240-249页

摘      要：该研究旨在构建Cc10基因敲除小鼠模型,并利用屋尘螨(HDM)诱导的哮喘模型,分析Cc10基因缺失小鼠的气道炎症表型。采用CRISPR/Cas9技术,设计并体外转录针对Cc10基因2号外显子的sgRNA和Cas9表达载体,显微注射至受精卵后获得F0代基因敲除小鼠,通过进一步繁育和筛选,最终获得稳定遗传的Cc10^(-/-)小鼠。利用HDM致敏和激发诱导小鼠过敏性哮喘模型,通过分析肺泡灌洗液(BALF)中白细胞及其分类计数、2型炎性相关细胞因子、肺组织PAS染色及Muc5ac mRNA的表达水平来评估Cc10基因缺失对小鼠气道炎症表型的影响。PCR扩增及测序结果显示,Cc10基因被成功敲除。Western blot分析表明,Cc10^(-/-)小鼠肺组织中CC10蛋白表达缺失。Cc10^(-/-)哮喘模型小鼠BALF中白细胞总数显著高于野生型(WT)哮喘模型组,且各分类细胞(中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞和嗜碱性粒细胞)数量均显著增加。Cc10^(-/-)哮喘模型小鼠BALF中2型炎性相关细胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平显著高于野生型(WT)哮喘模型组。肺组织PAS染色结果显示,Cc10^(-/-)哮喘模型小鼠具有更显著的支气管壁增厚、杯状细胞增生等病理变化,PAS染色评分显著高于WT哮喘模型组。PCR结果显示,Cc10^(-/-)哮喘模型小鼠肺组织Muc5ac mRNA表达水平显著高于WT哮喘模型组。该研究成功构建了Cc10基因敲除小鼠模型,并证明了Cc10基因缺失导致哮喘小鼠气道炎症加重,气道黏液分泌增多,提示CC10在调控气道炎症中发挥重要作用。该模型将为探索CC10在哮喘及其他呼吸系统疾病中的作用机制提供重要工具。

主 题 词：Cc10 CRISPR/Cas9 基因敲除小鼠 哮喘 炎症 Muc5ac 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.11844/cjcb.2025.02.0009

馆 藏 号：203157300...