支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：马鑫宇 蔡秋龙 肖飞 舒聪妍 袁月 陈婕 常亚军 王艳萍 吴爽靖 周建宏 樊海青 熊增平 高有 王灿斌 宋杰 Ma Xinyu;Cai Qiulong;Xiao Fei;Shu Congyan;Yuan Yue;Chen Jie;Chang Yajun;Wang Yanping;Wu Shuangjing;Zhou Jianhong;Fan Haiqing;Xiong Zengping;Gao You;Wang Canbin;Song Jie

作者机构：中国医学科学院医学生物学研究所国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室昆明650018 四川省药品检验研究院国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量控制与评价重点实验室成都611731 

出 版 物：《国际生物制品学杂志》 (International Journal of Biologicals)

年 卷 期：2025年第48卷第1期

页      码：39-45页

摘      要：目的利用实时荧光定量PCR(quantitative PCR,qPCR)建立支原体的快速检测方法。方法选择欧洲药典10.0版2.6.7规定可用于验证的8种支原体,根据支原体16S RNA序列设计特异性引物,建立支原体qPCR检测方法,并验证其特异性、灵敏度和重复性。结果成功筛选出采用qPCR检测支原体的合适引物,8种支原体在浓度为10^(5)~10^(6)CFU/mL时,循环阈值(cycle threshold,CT)在20~30,相同浓度的细菌对照无CT。除精氨酸支原体的可检测浓度为10~100 CFU/mL外,其他7种支原体可检测浓度均达到10 CFU/mL,10 CFU/mL的支原体CT在35~40之间。特异性检测实验重复3次,对照细菌全部未检出,10^(5)~10^(6)CFU/mL的上述8种支原体CT均在20~30,每种支原体3次特异性数据变异系数均小于10%。灵敏度实验重复3次,每次实验各支原体不同稀释浓度CT维持在20~40,变异系数均小于10%。结论建立的支原体检测qPCR方法特异性较好、灵敏度较高且重复性较好,可为生物制品中可能存在的支原体污染风险的及时控制提供帮助。

主 题 词：支原体属 聚合酶链反应 方法验证 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 071005[071005] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.cn311962-20240620-00043

馆 藏 号：203157366...