黄颡鱼实时荧光RPA及侧向流RPA试纸条快速现场鉴定方法的建立与应用

作     者：林玉 张旻 王娜 何舜平 张辉 唐永凯 方成池 景宏丽 张浪 沙航 段志强 王宽 吕继洲 吴绍强 LIN Yu;ZHANG Min;WANG Na;HE Shun-Ping;ZHANG Hui;TANG Yong-Kai;FANG Cheng-Chi;JING Hong-Li;ZHANG Lang;SHA Hang;DUAN Zhi-Qiang;WANG Kuan;LYU Ji-Zhou;and WU Shao-Qiang

作者机构：中国检验检疫科学研究院北京100176 三亚中国检科院生物安全中心三亚572025 国家市场监督管理总局技术创新中心(动植物产品质量与安全)北京100176 中国科学院水生生物研究所武汉430072 中国水产科学研究院长江水产研究所武汉430223 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心无锡214081 山东舜丰生物科技有限公司济南250014 

基　　金：“十四五”国家重点研发计划(2022YFF0608201) 国家市场监督管理总局科技创新人才计划(QNBJ202324) 中国检验检疫科学研究院基本科研业务费项目(2022JK43)资助 

出 版 物：《水生生物学报》 (Acta Hydrobiologica Sinica)

年 卷 期：2025年第49卷第4期

页      码：120-128页

摘      要：研究以黄颡鱼为目标对象,基于重组酶聚合酶扩增(Recombinase polymerase amplification,RPA)等温扩增技术,开发了实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条两种现场快速检测方法。这些方法能够用于快速、准确和灵敏地实时检测出黄颡鱼DNA。首先,通过对黄颡鱼及其近缘物种的鱼类线粒体基因组序列进行对比分析,针对COI基因保守区域,设计了特异性探针和引物。测试结果显示,在37℃条件下,实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条都具有良好的特异性。实时荧光型RPA方法能够在20min内完成黄颡鱼DNA的检测,且最低检测限可以达到102拷贝数/反应;而侧向流RPA试纸条的操作更加便捷,能够在10min内可完成对102低拷贝数的黄颡鱼DNA的扩增和鉴定。应用这两种RPA检测技术对149份长江流域常见鱼类进行现场检测,两种方法均显示出较高的准确性(准确率100%)。因此,研究开发的两种用于检测黄颡鱼的实时荧光型RPA和侧向流RPA试纸条方法,拥有操作简便、结果直观、准确率高、不依赖实验室仪器设备等优势,具有良好的现场快速检测应用前景。此外,其克服了形态学物种鉴定专业门槛高、难以鉴定残破组织样品的问题,检测靶标可跨越卵、鱼苗、成鱼等全生命周期,为水产品监管执法提供技术手段。

主 题 词：快速物种鉴定 重组酶聚合酶扩增 实时荧光型RPA 侧向流RPA试纸条 黄颡鱼 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090803[090803] 07[理学] 0908[0908] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.7541/2025.2024.0197

馆 藏 号：203157613...