神经氨酸酶基因联合抗黏液病毒基因的抗病毒作用

作     者：傅德智 张亚妮 陈昊 李伟 郑蒙蒙 王丹 张振韬 施青青 李碧春 FU De-zhi;ZHANG Ya-ni;CHEN Hao;LI Wei;ZHENG Meng-meng;WANG Dan;ZHANG Zhen-tao;SHI Qing-qing;LI Bi-chun

作者机构：扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009 苏州大学第一附属医院苏州215006 

基　　金：江苏省高校自然科学重大基础研究项目资助(08KJA230001) 高等学校博士学科点专项 "六大人才高峰"资助项目 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2013年第44卷第1期

页      码：78-86页

摘      要：拟构建神经氨酸酶(NA)基因和抗黏液病毒(Mx)基因双基因真核共表达载体,并检测基因表达以及转染鸡成纤维(CEF)细胞后的抗病毒效果。克隆了NA基因和突变型Mx基因的cDNA;分别定向插入真核细胞双顺反子载体pVITRO2中,酶切和测序鉴定双基因共表达载体pVITRO2-Mx-NA的正确性。用pVITRO2-Mx-NA转染NIH-3T3细胞,通过RT-PCR和间接免疫荧光(IFA)方法检测目的基因的表达。随后用pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞,利用RT-PCR及微量细胞病变抑制法测定重组蛋白抗新城疫病毒(NDV)的效果。结果:酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体pVITRO2-Mx-NA,在转染后的NIH-3T3和CEF细胞中同时检测到了NA和Mx基因的表达。联合基因表达的重组蛋白可保护CEF细胞在孵育的72h内免受NDV的感染,而转染了突变型Mx或者NA单基因真核表达载体的CEF细胞在孵育的48h内亦未受到NDV的侵染;与单基因转染组相比,联合基因转染组明显延迟NDV感染CEF细胞的时间,差异显著(P<0.05)。构建的双基因真核表达载体pVITRO2-Mx-NA转染CEF细胞后,其表达的重组蛋白Mx-NA在细胞水平上具有协同延缓NDV感染的能力,且优于单个基因。

主 题 词：NA Mx 双基因表达载体 抗病毒活性 抗NDV 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

馆 藏 号：203157642...