RNA干扰抑制Hep-2细胞人端粒酶逆转录酶基因表达对放射敏感性的影响

作     者：邱慧兵 周云峰 周福祥 谢丛华 骆志国 於海军 刘诗权 QIU Hui-bing;ZHOU Yun-feng;ZHOU Fu-xiang;XIE Cong-hua;LUO Zhi-guo;YU Hai-jun;LIU Shi-quan

作者机构：武汉大学中南医院肿瘤放化疗科430071 武汉大学肿瘤防治研究中心 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30171063) 

出 版 物：《中华肿瘤杂志》 (Chinese Journal of Oncology)

年 卷 期：2007年第29卷第1期

页      码：9-13页

摘      要：目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因特异性短发夹样RNA（shRNA）真核表达载体，观察其联合射线对人喉癌Hep-2细胞端粒酶活性和细胞存活的影响，研究hTERT基因在放射增敏中的作用。方法根据hTERT mRNA编码序列设计RNA干扰（RNAi）靶点，构建重组表达质粒pshRNA-hTERT，构建成功后，转染Hep-2细胞并作射线处理，用端粒重复序列扩增方法（TRAP-PCR-ELISA）检测端粒酶活性的动态变化，采用克隆形成分析方法观察质粒pshRNA—hTERT对Hep-2细胞放射敏感性的影响，计算放射增敏比SERSF2。结果转染质粒pshRNA-hTERT后，Hep-2细胞的hTERT mRNA表达抑制率为60．8％，质粒pshRNA-hTERT不仅能够抑制Hep-2细胞的端粒酶活性（P〈0．05），而且还可以抑制辐射诱导的端粒酶活性上升（P〈0．05）。照射前经pshRNA-hTERT处理24h，明显降低了2Gy照射后Hep-2细胞的存活分数（85．7％），与单纯放射组（67．7％）相比，差异有统计学意义（P〈0．05），pshRNA-hTERT的放射增敏比SERSF2为1．27。结论RNAi显著抑制了靶基因hTERT的表达，质粒pshRNA-hTERT能明显抑制2Gy照射诱导的Hep-2细胞端粒酶活性升高，并显著提高其体外放射敏感性；质粒pshRNA-hTERT的放射增敏作用可能与端粒酶活性受抑制有关。

主 题 词：RNAi 人端粒酶逆转录酶 Hep-2 端粒酶 放射敏感性 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:0253-3766.2007.01.003

馆 藏 号：203157770...