中东呼吸综合征冠状病毒半巢式PCR检测方法的建立

作     者：迟航 郑学星 盖微微 王翀 张渭蛟 王化磊 冯娜 王铁成 赵永坤 黄耕 高玉伟 杨松涛 夏咸柱 

作者机构：军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122 吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 中国农业科学院生物技术研究所北京100081 

基　　金：国家科技支撑计划项目(No.2013BAD12B04) 中国博士后科学基金项目(No.2013M541089) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2015年第10卷第1期

页      码：1-5,41页

摘      要：目的建立特异、灵敏的半巢式PCR方法以期用于检测中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)。方法根据MERS-CoV N蛋白基因设计并合成特异性内侧、外侧引物。通过条件优化,建立MERS-CoV半巢式PCR检测体系,扩增产物测序后与目的序列进行同源比对。以10倍系列稀释重组质粒为标准品,与普通PCR反应进行比较,检测半巢式PCR方法的灵敏度。以其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因为对照,检测半巢式PCR方法的特异性。结果使用建立的半巢式PCR方法扩增的特异片段与GenBank中发表的MERS-CoV基因序列同源性为100%;半巢式PCR检测方法的灵敏度为1.17×101拷贝,比普通一轮PCR扩增的灵敏度(1.17×105拷贝)提高了104倍;用该方法检测MERS-CoV基因为阳性,其他6种呼吸道病原体及冠状病毒基因检测均呈阴性。结论建立的MERS-CoV半巢式PCR方法具有良好的准确性、灵敏性和特异性,为MERS-CoV感染的诊断提供了一种新的、可靠的检测手段。

主 题 词：中东呼吸综合征冠状病毒 半巢式PCR 检测方法 敏感 特异 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.150101

馆 藏 号：203158179...