SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测猪瘟疫苗病毒含量

作     者：李安 崔言顺 沈志强 谢金文 王金良 李建亮 曲光刚 李峰 LI An;CUI Yan-shun;SHEN Zhi-qiang;XIE Jin-wen;WANG Jin-liang;LI Jian-liang;QU Guang-gang;LI Feng

作者机构：山东农业大学动物科技学院山东泰安271018 山东省滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600 

基　　金："十一五"国家科技支撑计划资助项目(2006BAD06A14-9) 山东省自主创新成果转化重大专项资助(2008ZHZX11103) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2010年第30卷第8期

页      码：1018-1022页

摘      要：为建立一种能够快速定量检测猪瘟兔化弱毒疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。对GenBank登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守的5′端非编码区设计1对针对猪瘟兔化弱毒疫苗的特异性引物,扩增片段为245 bp,且不与牛病毒性腹泻病毒以及其他猪源病毒发生非特异性反应。应用实时荧光定量RT-PCR法对16份猪瘟脾淋苗和细胞苗进行定量检测,结果表明,102拷贝/μL的总RNA即能得到特异性扩增,在107~102拷贝/μL线性范围内有良好的扩增曲线,并与兔体定型热反应有良好的相关性。该法具有敏感性、特异性、重复性好等优点,可望取代传统的兔热法用于猪瘟疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供一种新的有效工具。

主 题 词：猪瘟兔化弱毒疫苗株 荧光定量 定量检测 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2010.08.011

馆 藏 号：203158289...