bcr-abl P210和abl基因实时荧光定量PCR检测共用质粒标准品的制备及应用

作     者：江千里 孟凡义 江汕 杨柳 李冰 宋兰林 冯茹 周淑芸 JIANG Qian-li;MENG Fan-yi;JIANG Shan;YANG Liu;LI Bing;SONG Lan-lin;FENG Ru;ZHOU Shu-yun

作者机构：南方医科大学南方医院血液科广东省血液病重点专科广州510515 南方医科大学南方医院创伤骨科广州510515 

基　　金：广东省自然科学基金(04300193) 广东省计划科技项目(20052070034) 南方医科大学南方医院院级课题(20050003 20060037) 

出 版 物：《白血病．淋巴瘤》 (Journal of Leukemia & Lymphoma)

年 卷 期：2007年第16卷第3期

页      码：161-164页

摘      要：目的建立一个荧光实时定量PCR(RQ-PCR)共用质粒标准品,用于同时检测bcr-abl P210白血病融合基因和abl内参基因。方法分离K562细胞RNA,反转录为cDNA,以此为模板,设计引物进行PCR,PCR产物经琼脂糖电泳、胶回收,T-A载体克隆后,转化JM109工程菌,抽提质粒、测序、测定拷贝/μl,冻存备用。以RQ-PCR和定性巢式PCR进行验证,检测23例CML患者的骨髓标本,并同bcr-abl基因荧光原位杂交(FISH)结果比较。结果获得了预期的模板质粒,以欧洲抗癌协会推荐的引物探针RQ-PCR检测bcr-abl P210和abl基因,浓度相同时,Ct值相同;反复检测日内差和日间差均<5%。23例标本按FISH结果≥10%(n=8)、0.5%～10%(n=6)和阴性(n=9)分组,RQ-PCR结果分为0.492±0.263、0.023±0.033和(4.33±3.84)×10^(-4);FISH阴性组和其余两组间P值均<0.001,三组间P值均<0.05。结论该研究建立了bcr-abl P210基因和abl基因共用的质粒标准品,定量准确,性质稳定,能简化操作,满足临床检测和科研的要求。

主 题 词：基因,bcr-abl 实时定量PCR 质粒 白血病,髓样,慢性 Taqman探针 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2007.03.001

馆 藏 号：203159373...