锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力方案研究

作     者：杨文贤 朱富军 詹球 吕礼芳 王磊 刘亮 辛海明 童亚林 

作者机构：广西师范大学生命科学学院桂林541004 解放军第一八一医院烧伤整形科 解放军第一八一医院动物实验室 

基　　金：全军医学科学技术研究“十二五”面上基金(CWS11J277) 全军医学科学技术研究“十一五”计划课题(06MA121) 广阿自然科学基金(桂科自0991290) 广西科学研究与技术开发计划(桂科攻1140003A-39) 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2013年第29卷第3期

页      码：312-314页

摘      要：目的摸索锥虫蓝直接染色法在人羊膜细胞活力快速鉴定中的适宜浓度及染色时间。方法取健康剖宫产产妇的胎膜6张，浸泡后分离羊膜并剪成1cmX1Cm备用。（1）取部分制备好的羊膜分别浸泡于1、2、3、4g／L4种浓度的锥虫蓝溶液中，每个浓度下各浸泡1、3、4、10min后取出，在PBS中漂洗30s，更换PBS，继续漂洗30S。在光学显微镜下选取4个视野拍照，每个视野计数1000个细胞，同时计数蓝染细胞计算细胞死亡率。（2）另取部分制备好的羊膜浸泡于0．5g/L氯己定1h后行锥虫蓝直接染色，锥虫蓝溶液浓度与染色时间为前一实验结果选定的浓度、时间，并与1g／L锥虫蓝染色10ram对比。后续操作及检测同前一试验。对数据行两因素析因设计方差分析、Duncan多范围检验及LSD检验。结果（1）1、2、3g／L锥虫蓝染色1、3min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色4、10min后细胞死亡率明显高于1、3min（P值均小于0．05）。4g／L锥虫蓝染色l、3、4min后细胞死亡率相近（P值均大于0．05），染色10min后细胞死亡率显著高于1、3min（P值均小于0．05）。锥虫蓝浓度为2、3、4g／L时，各时相点细胞死亡率都显著高于1g／L（P值均小于0．05）。（2）对经0．5g／L氯己定浸泡1h羊膜染色显示，1g／L锥虫蓝染色1min细胞死亡率[（72．6±7．4）％]显著低于预计死亡率（100．0％，P〈0．05），染色3min细胞死亡率[（95．3±5．6）％]、染色10min细胞死亡率[（99．8±5．O）％]与预计死亡率相近（P值均大于0．05）。结论锥虫蓝直接染色法鉴定人羊膜细胞活力的适宜方案为浓度1g／L，染色时间3min。

主 题 词：锥虫蓝 着色剂 羊膜 时间因素 浓度因素 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2013.03.020

馆 藏 号：203159572...