靶向Nrf2基因shRNA慢病毒载体的构建及其对肝星状细胞Nrf2基因表达的沉默

作     者：李菁华 刘震雄 赵曙光 张哲 闻勤生 王景杰 张明鑫 LI Jinghua;LIU Zhenxiong;ZHAO Shuguang;ZHANG Zhe;WEN Qinsheng;WANG Jingjie;ZHANG Mingxin?

作者机构：第四军医大学消化内科西安710038 

基　　金：国家自然基金资助项目(81270485 81170376) 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2014年第45卷第12期

页      码：1119-1123,1231页

摘      要：目的设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响。方法应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体p GLV3-GFP中,构建p GLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况。结果测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109TU/ml,p GLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达。结论成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达。

主 题 词：Nrf2 短发夹状RNA 慢病毒载体 HSC-T6 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.13753/j.issn.1007-6611.2014.12.001

馆 藏 号：203159652...