慢病毒表达载体的构建及沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达

作     者：白璇 唐慧 郎丰超 郭强 

作者机构：昆明医科大学 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)消化内科云南省昆明市650032 云南省第一人民医院(昆明医科大学附属昆华医院)临床基础医学研究所云南省昆明市650032 中国科学院昆明动物研究所云南省昆明市650032 

基　　金：国家自然科学基金资助项目 No.81260323 云南省科技厅-昆明医科大学联合基金资助项目 No.2012FB095 昆明医科大学研究生创新基金资助项目 No.2012J004 云南省中青年学术技术带头人后备人才培养基金资助项目 No.2013HB083~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2014年第22卷第19期

页      码：2752-2757页

摘      要：目的:构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,沉默FOXQ1基因在大肠癌细胞系DLD-1中的表达.方法:根据FOXQ1基因的序列,设计合成3对shRNA干扰序列,退火后连接到载体质粒PLKO.1-puro,将重组质粒转化至STBl3感受态中,涂板培养挑取单菌落,摇菌后小提质粒,选取酶切及测序鉴定正确的重组质粒去内毒素大提,将质粒与辅助包装质粒pRSV-rev、pMDlg-pRRE和pCMV-VSV-G利用磷酸钙法共转染293-T细胞,收集病毒上清,感染目的细胞DLD-1,嘌呤霉素筛选FOXQ1沉默细胞,经荧光定量PCR及Western blot检测干扰效果.结果:酶切及测序结果显示shRNA成功插入载体PLKO.1-puro中,共转染293-T细胞成功获取病毒上清,感染DLD1细胞,经嘌呤霉素筛选出FOXQ1沉默细胞,荧光定量PCR及Western blot鉴定FOXQ1基因表达最高抑制率为90.4%.结论:通过构建FOXQ1基因shRNA慢病毒干扰系统,成功获取FOXQ1基因沉默细胞.为后续FOXQ1基因在肿瘤发生发展的研究奠定实验基础.

主 题 词：FOXQ1基因 慢病毒载体 RNA干扰 基因沉默 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203161172...