蓝氏贾第鞭毛虫表面变异抗原反义mRNA的鉴定

作     者：郑文彧 冯宪敏 鞠晓红 李瑶 王月华 ZHENG Wen-yu;FENG Xian-min;JU Xiao-hong;LI Yao;WANG Yue-hua

作者机构：吉林医药学院病原生物学教研室吉林吉林132013 吉林市中心医院 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81301450) 吉林省科技厅国际合作项目(No.20130413035GH) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2014年第9卷第8期

页      码：713-716页

摘      要：目的鉴定编码蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）表面变异抗原（VSP）的正义和反义mRNA。方法采用Trizol法抽提贾第虫单克隆滋养体总RNA,SMART法逆转录合成cDNA。设计合成针对VSPs基因3′端保守区域的特异性引物（内、外引物各1条）,结合SMART引物采用巢式PCR分别扩增得到来源于正义和反义mRNA的cDNA片段。将PCR产物与pGEM-T载体连接并测序,测序结果与GenBank库中的已知序列进行比对。根据测序结果设计特异性引物,以巢式PCR产物为模板,进行正义和反义cDNA的检测。结果巢式PCR显示,VSP正义mRNA和反义mRNA的cDNA均被成功扩增,电泳鉴定扩到产物分别位于0.1~4kb和0.2~2kb。经克隆、测序和序列比对,共获得34个贾第虫VSP编码序列,其中5个来源于正义mRNA的扩增产物,29个来源于反义mRNA的扩增产物,所得VSP编码基因均含有贾第虫VSP mRNA N端变异区和C端特异性保守区。根据5个正义mRNA序列设计的特异性引物在正义mRNA均得到扩增产物,而在反义mRNA仅有4个得到扩增产物。从29个反义mRNA序列中挑选3个设计特异性引物进行PCR,正义mRNA和反义mRNA均得到扩增产物。结论贾第虫VSP基因转录的多个正义mRNA和反义mRNA序列同时存在,该基因存在转录后基因沉默调节机制。

主 题 词：蓝氏贾第鞭毛虫 变异特异性表面蛋白 反义mRNA 正义mRNA 转录后基因沉默机制 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.140810

馆 藏 号：203161174...