神经营养肽NP14基因的合成及其在大肠杆菌中的高表达

作     者：张之勇 苑辉卿 姜安丽 蔡捷 任凯 胡晓燕 孔峰 张建业 ZHANG Zhi-yong;YUAN Hui-qing;JIANG An-li;CAI jie;REN kai;HU Xiao-yan;KONG feng;ZHANG Jian-ye

作者机构：山东大学医学院生物化学与分子生物学教研室山东济南250012 

基　　金：教育部科学技术研究重点资助项目(No106101) 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2007年第23卷第12期

页      码：2304-2308页

摘      要：目的:根据鞘脂激活蛋白原神经营养序列设计并构建短肽(neurotrophic peptide,NP)多拷贝串连表达载体,利用基因工程的方法制备短肽NP。方法:根据大肠杆菌的偏爱密码子设计并合成NP的碱基片段,通过PCR方法合成串联双拷贝2NP片段,经平端连接克隆到载体pUC18中。利用EcoT14I酶切pUC18-2NP后可产生非镜相对称黏性末端,与表达载体pETEcoT一次连接反应,得到一系列含有不同片段拷贝数的表达载体pETE-coT-multiNP,经PCR-array方法进行阳性克隆筛选、测序鉴定后转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达。结果:经IPTG诱导后,在BL21(DE3)菌中高效表达了2、4、8拷贝融合蛋白,并在每个单拷贝之间加入了溴化氢的切割位点,使融合蛋白切割后能够得到单拷贝的短肽。结论:短肽NP在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究其生物活性奠定了基础。

主 题 词：神经营养肽 融合蛋白质类 原核表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2007.12.004

馆 藏 号：203162397...