大鼠结膜成纤维细胞中血管内皮生长因子和受体的表达

作     者：程钢炜 赵家良 马建民 CHENG Gang-wei;ZHAO Jia-liang;MA Jian-min

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科100730 

出 版 物：《中华眼科杂志》 (Chinese Journal of Ophthalmology)

年 卷 期：2012年第48卷第6期

页      码：513-518页

摘      要：目的观察培养的大鼠结膜成纤维细胞中是否表达血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）。方法实验研究。健康Sprague Dawley大鼠5只，分别施行麻醉处死后，剪取球结膜组织，以组织块法接种并培养成纤维细胞。通过荧光倒置显微镜观察细胞培养情况，以间接免疫荧光法检测波形蛋白、角蛋白表达水平，对所培养的成纤维细胞进行鉴定；设计VEGF164、VEGFR-1（Flt-1）、VEGFR-2（Flk-1）3种基因的RNA引物序列，以Trizol法提取成纤维细胞中mRNA，对目的片断进行逆转录PCR扩增及凝胶电泳。扩增产物进行回收及测序，同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况。利用荧光定量PCR法观察培养的成纤维细胞中3种基因的熔解曲线和扩增曲线，同时采用间接免疫荧光法检测VEGFR-1的表达情况。结果大鼠结膜成纤维细胞中波形蛋白表达阳性，角蛋白表达阴性。逆转录PCR扩增后分别显示VEGF164、Fit-1、Flk-1条带，测序结果符合VEGF164、VEGFR-1（Flt-1）、VEGFR-2（Flk-1）基因序列。荧光定量PCR法检测结果显示上述基因均有陡直的扩增曲线，未见杂峰，指数扩增期均在30个循环内。免疫荧光法检测VEGFR-1蛋白表达阳性。结论大鼠结膜成纤维细胞存在VEGF及其受体的基因表达，有VEGFR-1的蛋白表达，抗VEGF类药物可能对大鼠的结膜成纤维细胞产生影响。

主 题 词：血管内皮生长因子A 血管内皮生长因子受体1 血管内皮生长因子受体2 结膜成纤维细胞 细胞,培养的 荧光抗体技术,间接 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100212[100212] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0412-4081.2012.06.008

馆 藏 号：203162598...