肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究

作     者：杨世亚 张义全 王丽 杨瑞馥 周冬生 李迎丽 邱景富 Yang Shiya;Zhang Yiquan;Wang Li;Yang Ruifu;Zhou Dongsheng;Li Yingli;Qiu Jingfu

作者机构：重庆医科大学公共卫生与管理学院营养与食品卫生教研室重庆400016 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:31071093 31170129 31200064 30871370和81000763) 

出 版 物：《重庆医科大学学报》 (Journal of Chongqing Medical University)

年 卷 期：2014年第39卷第9期

页      码：1197-1201页

摘      要：目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild type,WT)的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株△crp(肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除)和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取△crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果:肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上(转录起始位点为+1),抑制其转录表达。结论:CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。

主 题 词：肺炎克雷伯菌 环磷酸腺苷受体蛋白 kfuABC 转录调控 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13406/j.cnki.cyxb.000228

馆 藏 号：203162716...