马动脉炎病毒GL蛋白主要抗原域的表达及间接ELISA的初步建立

作     者：梁成珠 曹瑞兵 魏建超 朱来华 陈溥言 高宏伟 

作者机构：南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 青岛出入境检验检疫局青岛266002 

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科研资助项目(2003-IK-005)~~ 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2006年第46卷第3期

页      码：436-440页

摘      要：在分析马动脉炎病毒GL蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆GL蛋白一段抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因插入pET-32a的BamHⅠ和XhoⅠ之间构建了GL蛋白主要抗原域原核表达载体pET-GL1。将pET-GL1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了EAV GL蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用***亲和层析柱纯化重组EAV-GL1蛋白,以纯化的重组GL1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测马动脉炎病毒抗体的iGL1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为9.65μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用iGL1-ELISA对马血清样品进行检测,结果表明iGL1-ELISA与病毒中和试验的符合率达到94.1%,与国外同类试剂盒的符合率达到95.6%。

主 题 词：马动脉炎病毒 GL蛋白 主要抗原域 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090601[090601] 1002[医学-临床医学类] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2006.03.020

馆 藏 号：203162721...