人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定

作     者：杨翔云 张勇 赖小刚 裴建明 杨安钢 胡玉珍 周士胜 YANG Xiang-yun;ZHANG Yong;LAI Xiao-gang;PEI Jian-ming;YANG An-gang;Hu Yu-zhen;ZHOU Shi-sheng

作者机构：第四军医大学生理学教研室陕西西安710032 第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 解放军第二0二医院辽宁沈阳110003 大连大学医学院生理学教研室辽宁大连116622 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(批准号:30270602) 

出 版 物：《医学研究生学报》 (Journal of Medical Postgraduates)

年 卷 期：2006年第19卷第6期

页      码：487-491,i0011页

摘      要：目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体***的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体***连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为***-siC lC-21和***-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。

主 题 词：ClC-2基因 人胶质瘤 RNA干扰 重组载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-8199.2006.06.003

馆 藏 号：203162744...