人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达

作     者：袁斌 丁丽华 熊志红 韩聚强 张浩 王晓辉 杨智洪 叶棋浓 YUAN Bin;DING Li-Hua;XIONG Zhi-Hong;HAN Ju-Qiang;ZHANG Hao;WANG Xiao-Hui;YANG Zhi-Hong;YE Qi-Nong

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100850 

基　　金：全军医药卫生科研基金项目(06J021) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2008年第19卷第2期

页      码：181-184页

摘      要：目的:设计并构建人eya2(eyes absent2)基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法:以人eya2为靶基因,以pSliencer2.1-U6neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Western blot和转录活性实验检测其抑制效果。结果:重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2 siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论:构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。

主 题 词：eya2基因 小干扰RNA 表达 转录 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2008.02.007

馆 藏 号：203163277...