猪脑心肌炎病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及应用

作     者：施开创 莫胜兰 胡丽萍 杨荣 郑敏 李军 SHI Kai-chuang;MO Sheng-lan;HU Li-ping;YANG Rong;ZHENG Min;LI Jun

作者机构：广西动物疫病预防控制中心南宁530001 

基　　金：广西青年科学基金项目(桂科青0728047) 广西科技创新能力与条件建设基金项目(08-05-01D) 

出 版 物：《南方农业学报》 (Journal of Southern Agriculture)

年 卷 期：2011年第42卷第3期

页      码：324-327页

摘      要：【目的】实现快速、准确地对猪脑心肌炎进行临床诊断和病原学检测。【方法】根据GenBank中已发表的猪脑心肌炎病毒(EMCV)3D基因序列设计合成1对特异性引物,优化反应条件,建立了EMCV一步法RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证。【结果】一步法RT-PCR可以从EMCVB JC3株中扩增出与试验设计相符的286bp特异性片段,而对猪口蹄疫病毒(FMDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、BHK-21正常细胞的扩增结果均为阴性;对EMCVBJC3株细胞毒的敏感度达到2TCID50;对10份EMCVB JC3株细胞毒进行重复性检测,结果均一致;对207份临床疑似发病猪的病料进行检测,其阳性检出率为9.18%。【结论】所建立的EMCV一步法RT-PCR检测方法具有特异、灵敏、高效、快速等特点,可用于EMCV的临床检测及流行病学调查。

主 题 词：猪 脑心肌炎病毒(EMCV) 3D基因 一步法RT-PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.2095-1191.2011.03.023

馆 藏 号：203164548...