刚地弓形虫NT株MIC3基因的克隆和原核表达

作     者：白昀 刘茂军 冯志新 白方方 熊祺琰 孔猛 吴叙苏 邵国青 BAI Yun;LIU Mao-jun;FENG Zhi-xin;BAI Fang-fang;XIONG Qi-yan;KONG Meng;WU Xu-su;SHAO Guo-qing

作者机构：江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心江苏南京210014 南京天邦生物科技有限公司江苏南京211102 

基　　金：江苏省科技支撑计划(社会发展)项目(BE2010758) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2011年第27卷第6期

页      码：1295-1299页

摘      要：为构建刚地弓形虫微线体蛋白3(MIC3)原核表达体系,获得高纯度MIC3蛋白用于制备单克隆抗体,评价MIC3蛋白在临床诊断方面的应用价值,根据刚地弓形虫MIC3基因编码的已知序列设计引物,应用PCR技术从刚地弓形虫NT株的基因组DNA中扩增出去除信号肽的MIC3基因,将该基因克隆入pET-32a(+)表达载体,构建pET-32a(+)表达载体,并转化入大肠杆菌(***)Trans 5α感受态细胞。扩增的MIC3基因与GenBank中相应基因序列(AF509564.1)的同源性达99.9%。将阳性重组表达质粒转化入*** BL21-codon plus,经IPTG20℃低温诱导表达,SDS-PAGE分析结果显示,MIC3融合蛋白分子量约为56 000。Western-blotting分析鉴定结果表明,MIC3融合蛋白可被猪抗弓形虫免疫血清所识别。获得的MIC3融合蛋白具有一定的反应原性,为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。

主 题 词：刚地弓形虫 MIC3基因 克隆 原核表达 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2011.06.022

馆 藏 号：203165025...