体外RNAi对S100A4基因表达及其对骨肉瘤细胞侵袭、转移能力的影响

作     者：马旭 杨毅欣 王岩峰 安贵峰 商冠宁 吕刚 MA Xu;YANG Yi-xin;WANG Yan-feng;AN Gui-feng;SHANG Guan-ning;L(ü) Gang

作者机构：沈阳市骨科医院辽宁沈阳110044 中国医科大学附属第一医院骨科辽宁沈阳110001 Department of Biological Sciences Emporia State University 

出 版 物：《大连医科大学学报》 (Journal of Dalian Medical University)

年 卷 期：2012年第34卷第1期

页      码：36-41页

摘      要：[目的]应用RNAi技术抑制人骨肉瘤MG-63细胞S100A4基因的表达,并观察对MG-63细胞增殖及体外侵袭能力的影响。[方法]合成针对S100A4的siRNA载体,并根据目的mRNA序列,设计3条RNA干扰靶序列及非特异性的siRNA。将培养细胞分为C组(空白对照组);C1组(转染脂质体组);C2组(转染非特异性的siRNA组);S1、S2、S3组(转染特异性的siRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组)。荧光倒置显微镜下观察转染情况,Real-time PCR方法检测转染前后S100A4基因表达变化,应用Western-Blot方法检测转染前后S100A4蛋白表达变化。筛选出转染效率最高的特异性siRNA组作为后续实验的实验组。后续实验分为正常细胞组,阴性对照组和实验组,应用MTT法和平板克隆形成实验检测细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭及转移能力变化。[结果]倒置显微镜下C2组与S1、S2、S3组培养细胞的细胞浆均可见绿色荧光。S1、S2与S3组的S100A4 mRNA表达水平均有不同程度的下调,以S3组最为显著。Western-Blot检测S100A4蛋白表达结果与其相符。MTT法和平板克隆形成实验均显示S3组细胞增殖受到抑制,与正常细胞组、阴性对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。Tran-swell小室实验显示RNA干扰S100A4基因表达后肿瘤细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,与正常细胞组、阴性对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)。[结论]体外合成的S100A4特异性siRNA能够抑制骨肉瘤细胞系MG-63的S100A4表达,进而抑制细胞的增殖和体外侵袭能力。

主 题 词：RNA干扰 骨肉瘤 S100A4 侵袭 转移 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203165079...