小鼠微小RNA miR-21真核表达载体构建及其在293细胞的活性表达

作     者：龙爽 粟永萍 任泂 孙慧勤 王涛 LONG Shuang;SU Yong-ping;REN Jiong;SUN Hui-qin;WANG Tao

作者机构：第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆市纳米医药工程技术研究中心，重庆400038 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30901558) 烧伤、创伤与复合伤国家重点实验室自主课题(SKLZZ201122) 

出 版 物：《局解手术学杂志》 (Journal of Regional Anatomy and Operative Surgery)

年 卷 期：2014年第23卷第2期

页      码：111-114页

摘      要：目的：构建小鼠微小RNA miR-21的真核表达载体,在人胚肾293细胞中验证其活性表达,为进一步以此载体研究miR-21的功能打下基础。方法根据小鼠miR-21的成熟序列及其上下游约170 bp的序列设计引物,利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增含有miR-21前体的片段382 bp,克隆到质粒pRc/CMV,对重组质粒经双酶切及测序分析,鉴定完全正确后转染人胚肾293细胞,G418(1000 mg/L)筛选后获得miR-21稳定表达细胞系, Northern blot验证其在293细胞的过表达；同时构建pmiR-21-Luc reporter荧光素酶报告质粒,与miR-21重组质粒共转染293细胞进行荧光素酶活性分析,验证其调控活性。结果成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,其可以在293细胞中稳定高效表达,荧光素酶活性实验证实其有生物活性。结论成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了实验基础。

主 题 词：miRNAs miR-21 真核表达载体 293细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.11659/jjssx.1672-5042.201402001

馆 藏 号：203165947...