肠出血性大肠杆菌毒力因子Z1444的原核表达及其丝/苏氨酸激酶活性验证

作     者：李崭 李涛 陈芳红 刘雄 周育森 王慧 LI Zhan;LI Tao;CHEN Fang-Hong;LIU Xiong;ZHOU Yu-Sen;WANG Hui

作者机构：广西医科大学广西南宁5300002 军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

基　　金：北京市自然科学基金(7122134) 

出 版 物：《生物技术通讯》 (Letters in Biotechnology)

年 卷 期：2014年第25卷第3期

页      码：353-356页

摘      要：目的:在大肠杆菌中表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)毒力岛上的毒力因子Z1444并纯化,对其丝/苏氨酸激酶活性进行初步检测。方法:根据GenBank中Z1444基因序列及pET-28a(+)载体的多克隆位点设计引物,以EHECO157∶H7全菌裂解液为模板,经PCR钓取1047 bp的目的片段,与表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a(+)-Z1444,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达并经SDS-PAGE鉴定,利用体外反应体系鉴定重组蛋白的丝/苏氨酸激酶活性。结果:双酶切和测序鉴定表明,pET-28a(+)-Z1444原核表达质粒构建正确;诱导表达后经纯化,获得纯度在90%以上的可溶性重组Z1444,相对分子量约为38×103;体外酶活实验验证了Z1444的丝/苏氨酸激酶活性。结论:Z1444在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,为后续功能验证奠定了基础。

主 题 词：肠出血性大肠杆菌 毒力因子Z1444 可溶性原核表达 丝 苏氨酸激酶活性 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-0002.2014.03.011

馆 藏 号：203166032...