仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

作     者：周洁 赵丽娟 陶凌云 倪丽菊 高诚 陈洪岩 ZHOU Jie;ZHAO Li-juan;TAO Ling-yun;NI Li-ju;GAO Cheng;CHEN Hong-yan

作者机构：上海实验动物研究中心上海201203 扬州大学兽医学院扬州225009 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心哈尔滨150001 

基　　金：上海市科委科技创新行动计划(11140901000) 上海市科委研发平台专项(15DZ2292400) 

出 版 物：《中国实验动物学报》 (Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica)

年 卷 期：2016年第24卷第3期

页      码：293-298页

摘      要：目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为2.1TCID_(50) SeV,比RT-PCR方法高102倍;肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致;通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。结论建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。

主 题 词：仙台病毒 RT-LAMP 实时监控 快速检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4847.2016.03.015

馆 藏 号：203166329...