兔出血症病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

作     者：王波 李桂黎 王印 姚学萍 杨泽晓 WANG Bo;LI Gui-li;WANG Yin;YAO Xue-ping;YANG Ze-xiao

作者机构：四川农业大学动物医学院四川成都611130 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(3140222) 四川省教育厅青年基金资助项目(11ZB064) 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2016年第28卷第3期

页      码：400-405页

摘      要：兔病毒性出血症(rabbit hemorrhagic disease,RHD)是一种具有高度传染性的疾病,严重威胁养兔业的健康发展。为了建立一种能够快速、高效、敏感的检测RHDV的方法,试验设计了一对特异性引物进行PCR扩增,得到RHDV VP60基因中979 bp的保守序列,并将其克隆到p MD19-T载体中作为标准品建立标准曲线;在扩增区域内设计一对简并引物,建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,优化反应条件,并验证该方法的敏感性、特异性、重复性。结果表明:该方法可检测到的模板的最低拷贝数为8.18×101copies,只能特异性扩增RHDV,pGM19-T-EBHSV、兔巴氏杆菌、兔沙门氏菌、兔大肠埃希菌和健康兔组织RNA的扩增均为阴性,具有良好的特异性和重复性;同时用此方法对人工感染家兔的内脏分别进行检测,结果表明SYBR GreenⅠ荧光定量PCR能快速检测到不同脏器中的兔病毒性出血症病毒RNA含量,可用于临床兔瘟病毒的检测。

主 题 词：兔病毒性出血症病毒(RHD) VP60 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-1524.2016.03.07

馆 藏 号：203166914...