PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因

作     者：郭薇 张建琼 沈传来 孟凡岩 谢维 GUO Wei, ZHANG Jian qiong, SHEN Chuan lai, MENG Fan yan,XIE Wei(Key Laboratory of Genetical Diagnosis and Therapy in Jiangsu Province, International Reference Laboratory of “HLA Expression and Tumors”,Research Center of Genetics, Southeast University,Nanjing 210009, China)

作者机构：江苏省基因诊断与治疗重点实验室"HLA表达与肿瘤"国际参考实验室东南大学医学院遗传学研究中心南京210009 

基　　金：教育部留学回国人员启动基金资金项目 (教外司留2 0 0 1/3 45 ) 国家自然科学基金资助项目 (No 3 0 2 712 16) 

出 版 物：《上海免疫学杂志》 (Shanghai Journal of Immunology)

年 卷 期：2003年第23卷第4期

页      码：240-243页

摘      要：建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ,扩增HLA A基因 ;再设计两对HLA A2组特异性引物 ,采用套式PCR分别扩增HLA A基因的 5’端和 3’端 ,如出现特异条带 ,则将后两对引物的PCR产物进行测序分析 ,对照HLA A2组等位基因的第 2和第 3外显子序列图 ,确定是否为HLA A 0 2 0 1 1～ 0 2 0 1 6的 6个等位基因。结果 :以HLA A 0 2 0 1阳性的T2细胞株为阳性对照进行检测 ,结果完全正确 ,并设立非HLA A 0 2 0 1的A2细胞株RML (HLA A 0 2 0 4 )及Raii细胞株 (非A2组 )为对照 ,同时随机检测 30份门诊病人血样 ,其中 7份为HLA A2阳性 ,经测序 ,2例为HLA A 0 2 0 1 1 ,1例为HLA A 0 2 1 1或 0 2 35 ,1例是HLA A 0 2 0 6或0 2 2 1或 0 2 4 1或 0 2 4 4或 0 2 5 1或 0 2 5 4 ,1例是HLA A 0 2 0 5或 0 2 1 4 ,1例是HLA A 0 2 34或 0 2 35 ,1例是 0 2 5 0。本方法利用位点特异性引物进行 2～ 3次PCR扩增 ,结合PCR产物测序便可相对简便经济地检测出HLA A 0 2 0 1的全部 6个亚等位基因 ,为快速检测其他特定HLA等位基因?

主 题 词：HLA分型 PCR-SSP 测序 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-2478.2003.04.007

馆 藏 号：203167302...