Wilson病基因突变体的体外构建及表达研究

作     者：吴志英 王柠 慕容慎行 

作者机构：福建医科大学附属第一医院神经内科福州350005 

基　　金：国家自然基金资助项目 ( 3 0 0 0 0 182 ) 福建省重大科技项目 (2002Y001及200 0Z142) 

出 版 物：《中华神经科杂志》 (Chinese Journal of Neurology)

年 卷 期：2003年第36卷第5期

页      码：339-342页

摘      要：目的　研究并比较正常ATP7B蛋白及其突变体蛋白的表达水平 ,为进一步探寻ATP7B蛋白参与铜转运的机制奠定基础。方法　构建含健康人全长Wilson病 (WD)cDNA片段的真核细胞表达质粒ATP7BcDNA/ pcDNA3,定点诱变三种具有代表意义的突变体表达质粒Arg778Leu/pcDNA3、Gln914Ter/ pcDNA3和Thr935Met/ pcDNA3;同时设计并制备包含ATP7B蛋白N端主要功能区的具有高度特异性和敏感性的ATP7Bn33 6 2 9抗体 ;分别以上述质粒瞬时转染中国仓鼠卵细胞 (Chinesehamsterovary ,CHO) ,收集细胞提取蛋白 ,以ATP7Bn33 6 2 9抗体为一抗 ,免疫印迹分析并比较正常和突变体ATP7B蛋白的表达程度。结果　ATP7B蛋白在正常ATP7BcDNA/pcDNA3表达质粒和Arg778Leu/ pcDNA3、Thr935Met/pcDNA3错义突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量一致 ,而在Gln914Ter/ pcDNA3截短突变体表达质粒转染的CHO细胞中表达量明显增加。结论　成功构建了WD突变体表达质粒并在转染细胞中表达 ,为进一步的功能研究打下基础。错义突变未改变ATP7B蛋白表达量 ,提示错义突变引起铜代谢障碍的机制与蛋白表达量无关。截短突变产生的ATP7B蛋白产物表达量增加可能与其所需的翻译时间相对较短有关。

主 题 词：Wilson病 基因突变 ATP7B蛋白 铜代谢障碍 发病机制 真核细胞表达质粒 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100201[100201] 1009[医学-法医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1006-7876.2003.05.006

馆 藏 号：203167434...