下调CD133表达对肝癌干细胞上皮间质化和侵袭能力影响及机制探讨

作     者：牛坚 王月 NIU Jian;WANG Yue

作者机构：徐州医学院附属医院普通外科江苏徐州221002 

基　　金：江苏省333人才项目(Ⅲ-2290) 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2016年第23卷第11期

页      码：710-715页

摘      要：目的肿瘤干细胞是肿瘤复发和转移的原因。探讨CD133基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)的重组质粒,对人肝癌细胞株MHCC-H的CD133基因表达、上皮间质化和侵袭能力的影响。方法通过免疫磁珠分选MHCC-H细胞中的CD133阳性细胞,设计并合成特异性靶向CD133的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)片段,并构建pSuper retro GFP-neo-siRNA-CD133表达质粒,将其转入MHCC-H-CD133+细胞,并设空白对照组、阳性对照组。通过G418筛选出稳定株。通过粘附实验、Boyden小室实验和软琼脂克隆形成实验观察各细胞株侵袭能力的变化。采用明胶酶法测定肝癌细胞的基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的含量,蛋白质印迹法检测上皮间质化相关基因的变化。结果通过免疫磁珠分选后的MHCC-H细胞中CD133表达率为83.5%。qRT-PCR结果显示,shCD133组相对空白对照组的CD133表达量下降了80%,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果显示,shCD133组的CD133表达明显下降,约为空白对照组的12%和shNC组的10%,均P<0.05。shCD133组的粘附能力为86.9±12.4,较空白对照组的568.5±53.2和shNC组的538.8±35.6明显下降,P<0.05。Boyden小室实验发现,shCD133组穿膜细胞数为(80.6±11.4)个,较空白对照组的(228.5±33.2)个和shNC组的(230.8±32.9)个明显减少,P<0.05。软琼脂克隆形成率的检测发现,shCD133的细胞克隆形成(60±5)个,比空白对照组的(178±23)个和shNC组的(168±25)个明显下降,P<0.05。明胶酶法检测发现,shCD133组MMP-2和MMP-9相对活性为0.4±0.14和0.6±0.16,较shNC组的1.03±0.19和1.3±0.16明显下降,P<0.05。蛋白质印迹法检测结果表明,shCD133组N-cadherin蛋白表达为36.3±4.5,Snail为53.6±6.7,Slug为41.63±5.6,Twist为39.4±3.9,均明显低于空白对照组的87.6±8.6、80.6±7.5、81.9±9.2和83.9±9.1,也明显低于shNC组的89.4±9.6、83.5±8.9、85.1±8.7和87.6±9.3,均P<0.05;而shCD133组E-cadherin表达为88.4±9.2,较空白对照组的57.6±8.7和shNC组的53.9±8.9明显上调,P<0.05。结论沉默MHCC-H细胞CD133基因的表达能有效抑制其上皮间质化和侵袭能力,CD133基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。

主 题 词：肝癌 干细胞 CD133 细胞浸润 基因表达 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.16073/j.cnki.cjcpt.2016.11.004

馆 藏 号：203168974...