一管法MLPA荧光探针溶解曲线分析技术检测15种高危型HPV方法的建立

作     者：张肄鹏 张惠玲 张青 黄珍 刘卫东 周丽英 ZHANG Yipeng;ZHANG Huiling;ZHANG Qing;HUANG Zhen;LIU Weidong;ZHOU Liying

作者机构：深圳市龙华新区中心医院深圳广东518110 

出 版 物：《贵阳医学院学报》 (Journal of Guiyang Medical College)

年 卷 期：2016年第41卷第6期

页      码：675-680页

摘      要：目的：结合多重连接依赖探针扩增（MLPA）和荧光探针溶解曲线分析技术，建立一种一管法同时检测并分辨15种高危型HPV的方法。方法：根据各HPV亚型的特异性序列设计MLPA探针，并在各亚型的ML—PA探针中加入溶解温度（Tm）不同的人工核酸序列作为识别标志；使用特殊的耐高温连接酶和热启动Taq酶，通过温度控制使探针杂交、连接、PCR在一管反应中顺序进行；以各HPV亚型10^2拷贝至10^6拷贝的标准品质粒作为模版进行敏感度实验；将10^2-10^6拷贝的HPV亚型标准品进行两两混合作为模版，检测本方法对混合样本的检测能力；使用本方法和HPV分型试剂盒（导流杂交法）对临床样本进行平行检测，比较2种方法的差异。结果：本方法可在一次反应内顺序完成MLPA探针杂交、连接、扩增3个步骤，扩增结果可通过不同荧光通道不同Tm值的溶解峰分辨不同的HPV亚型；本方法对标准品的检测灵敏度比经典的MLPA3步法反应下降约一个数量级；本方法可同时检测至少2种HPV亚型的混合感染；对临床阳性标本的检出率与导流杂交法结果基本一致。结论：本研究成功建立了一种利用一管法MLPA荧光探针溶解曲线技术检测15种高危型HPV的方法。

主 题 词：乳头状瘤病毒,人 DNA探针,HPV 溶解曲线分析 多重连接依赖探针扩增 

学科分类：1010[医学-医学技术类] 10[医学] 

D　O　I：10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.013

馆 藏 号：203170956...