牛轮状病毒UK株NSP1基因序列分析及原核表达

作     者：冉旭华 曹思 张峣 魏晓曼 闻晓波 倪宏波 朱战波 RAN Xu-hua;CAO Si;ZHANG Yao;WEI Xiao-man;WEN Xiao-bo;NI Hong-bo;ZHU Zhan-bo

作者机构：黑龙江八一农垦大学预防兽医学省重点实验室大庆163319 

基　　金：国家自然科学青年基金(31201909) 黑龙江博士后科研启动资助项目(LBH-Q13134) 黑龙江省自然科学青年基金(QC2013C028) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第42卷第5期

页      码：1104-1109页

摘      要：轮状病毒是引起多种幼龄动物及5周龄以下儿童腹泻的主要病原体。NSP1非结构蛋白是轮状病毒基因5的产物,为长约55ku的RNA结合蛋白。现已发现NSP1蛋白是一种毒力决定因子,可颉颃宿主先天性免疫应答。参照GenBank收录的牛轮状病毒UK株序列设计并合成1对特异性引物,本试验利用RT-PCR方法扩增牛轮状病毒UK株NSP1基因,克隆入pET-28a(+)表达载体,经双酶切和测序鉴定,并利用分子生物学软件进行同源性比对分析。本试验结果显示获得的NSP1基因全长编码区序列为1 473bp,编码491个氨基酸,与美国WC3株同源性最高。将阳性重组质粒转入*** Rosetta(DE3)宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行分析,结果表明重组蛋白分子质量约为55ku,以包涵体形式表达,可与鼠抗His-tag抗体反应。本试验成功获得牛轮状病毒UK株NSP1基因,且实现了在原核表达系统中高效表达重组蛋白,本试验结果为研究NSP1蛋白在细胞内定位与其活性之间的相互关系奠定了基础。

主 题 词：牛轮状病毒UK株 NSP1 序列分析 原核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.05.011

馆 藏 号：203171358...