2型猪链球菌SspA基因序列及其免疫原性分析

作     者：胡巧云 袁小宁 熊毅 何奇松 黄胜斌 孙翔翔 吴军 颜健华 冯淑萍 李军 郭建刚 

作者机构：广西动物疫病预防控制中心南宁530001 广西大学生命科学技术学院南宁530005 

基　　金：广西自然科学基金项目(2012GXNSFBA053080) 

出 版 物：《南方农业学报》 (Journal of Southern Agriculture)

年 卷 期：2015年第46卷第7期

页      码：1310-1314页

摘      要：【目的】明确2型猪链球菌的枯草杆菌素样丝氨酸蛋白酶(Ssp A)基因序列特征及其原核表达重组蛋白的免疫原性,为2型猪链球菌病的诊断及疫苗研究奠定基础。【方法】针对Ssp A基因上、下游序列分别设计1对引物,从112株2型猪链球菌临床分离株中扩增其相应片段,并进行测序分析;同时以Ssp A基因的重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C分别转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)后经IPTG诱导表达,再以SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况,Western blotting鉴定其免疫原性。【结果】Ssp A基因上游片段较保守,而下游片段变异区间较大。在IPTG诱导下,含有重组质粒p ET28a-Ssp N、p ET28a-Ssp M和p ET28a-Ssp C的菌株表达出3段融合蛋白,其中,Ssp N和Ssp C重组蛋白存在于破碎菌体的上清液中,而Ssp M重组蛋白以包涵体形式存在于沉淀中,其大小为:Ssp N重组蛋白66 k D,Ssp M重组蛋白65 k D,Ssp C重组蛋白32 k D。Western blotting鉴定结果显示,3段重组蛋白均能与2型猪链球菌感染血清发生反应,且以Ssp N重组蛋白反应最强烈,而与以全菌灭活苗制备的猪血清未发生特异性反应。【结论】2型猪链球菌Ssp A基因上游片段较保守,经大肠杆菌重组表达的Ssp N蛋白免疫原性较强,且具备鉴别2型猪链球菌感染与免疫的潜力,可作为研究猪链球菌病血清学诊断的候选抗原片段。

主 题 词：2型猪链球菌 SspA基因 分段表达 免疫原性 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j:issn.2095-1191.2015.7.1310

馆 藏 号：203171376...