草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达

作     者：周智敏 韩崇选 ZHOU Zhi-min;HAN Chong-xuan

作者机构：西北农林科技大学林学院陕西杨陵712100 

基　　金：国家林业局林业公益性行业科研专项(201404405) 

出 版 物：《西北林学院学报》 (Journal of Northwest Forestry University)

年 卷 期：2016年第31卷第2期

页      码：181-187页

摘      要：哺乳动物卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗卵透明带蛋白抗体可以有效阻碍精卵结合。为了探究草兔卵透明带2(zona pellucida 2,ZP2)蛋白抗原性,以及定位抗原表位。根据GenBank上欧洲兔的卵透明带2基因序列,设计5′端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2基因。测序获得的2 184bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于ZP235-56和ZP2698-717。将克隆获得954bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-hZP2后转化大肠杆菌(Escherichia coli,***)BL21。重组的*** BL21经诱导后表达41.17kD可溶性的hZP2融合蛋白,经优化诱导表达体系后,确定较好的诱导条件是37℃下0.7mmol·L-1 IPTG诱导15h。经Western blot鉴定,结果表明相对于表达ZP2大片段基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高。

主 题 词：卵透明带 草兔 抗原表位 ZP2 诱导表达 

学科分类：090703[090703] 0907[农学-草药学] 09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1001-7461.2016.02.31

馆 藏 号：203171401...