甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子筛选方法的建立

作     者：曾韦锟 毛普加 洪愉 冯梦蝶 许泽仰 宋武战 杨洪文 赵继华 王纪爱 黄芬 井申荣 ZENG Weikun;MAO Pujia;HONG Yu;FENG Mengdie;XU Zeyang;SONG Wuzhan;YANG Hongwen;ZHAO Jihua;WANG Jiai;HUANG Fen;JING Shenrong

作者机构：昆明学院医学院临床检验教研室昆明650214 昆明理工大学医学院病原微生物学实验室昆明650500 成都军区昆明总医院核医学科昆明650532 

基　　金：国家自然科学基金项目31160193 云南省教育厅科学研究基金项目2010Y398 云南省应用基础研究面上项目2010ZC055 2012FB135 

出 版 物：《郑州大学学报（医学版）》 (Journal of Zhengzhou University(Medical Sciences))

年 卷 期：2015年第50卷第6期

页      码：745-749页

摘      要：目的:通过构建p CAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法:PCR无义突变去除p CAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点,并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点,构建启动子陷阱载体p CAT3。TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组,插入p CAT3载体中,转化至大肠杆菌DH5α,通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌;随机挑取1株提取质粒,测序及比对分析插入序列;根据分析结果设计引物,扩增可能的启动子序列,并插入验证载体p-3lysm-egfp,转化DH5α,荧光显微镜观察。结果:成功构建p CAT3启动子陷阱载体,获得约100启动子文库菌,其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的ORF4启动子;插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论:该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子,为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。

主 题 词：甲型副伤寒沙门菌 噬菌体 启动子 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 071005[071005] 10[医学] 

D　O　I：10.13705/j.issn.1671-6825.2015.06.004

馆 藏 号：203171549...