黄枝油杉ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作     者：谢伟玲 柴胜丰 蒋运生 唐健民 邹蓉 韦霄 XIE Weiling;CHAI Shengfeng;JIANG Yunsheng;TANG Jianmin;ZOU Rong;WEI Xiao

作者机构：广西喀斯特植物保育与恢复生态学重点实验室广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所桂林541006 广西师范大学生命科学院桂林541004 

基　　金：广西林业科技项目(编号:桂林科字第26号) 广西科技攻关项目(编号:桂科能1598025-49) 桂林市科技攻关项目(编号:20130414) 

出 版 物：《种子》 (Seed)

年 卷 期：2016年第35卷第6期

页      码：17-21页

摘      要：先运用正交设计进行初步筛选,再用单因素设计逐一优化对ISSR-PCR扩增效果有影响的Mg2＋、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、模板DNA、循环次数及退火温度。建立了黄枝油杉的最佳反应体系和程序,即25μL体系中含2.0mmol/L的Mg2＋、1.5UTaq DNA聚合酶、0.10mmol/L的dNTP、1.0μmol/L的引物、30ng的模板DNA以及2.5μL10×PCR buffer,其余的用灭菌的ddH2O补够25μL。扩增程序：94℃预变性5min;94℃变性30s,48～56℃（不同的引物,其退火温度不同,根据具体引物而定）退火45s,72℃延伸90s,以上3个步骤循环50次;最后72℃延伸7min;扩增产物放在4℃冰箱中保存。该体系和程序稳定性良好,结果可靠,可用于黄枝油杉遗传多样性分析。

主 题 词：黄枝油杉 ISSR-PCR 正交设计 单因素试验 

学科分类：0907[农学-草药学] 08[工学] 0829[工学-安全科学与工程类] 09[农学] 

D　O　I：10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.06.017

馆 藏 号：203171837...