人源特异性抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体的制备及鉴定

作     者：耿以如 熊四平 唐奇 张晓 陈雅 徐亚如 周荧 仇镇宁 冯振卿 朱进 

作者机构：南京医科大学病理学系江苏南京211166 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室江苏南京211166 南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科江苏南京210011 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 

基　　金：国家自然科学基金(81273325,81202370) 江苏省社会发展项目(BE2011842) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2016年第36卷第6期

页      码：693-699页

摘      要：目的 :利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体。方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链可变区序列(Vκ),通过overlap PCR将Fab094的Fd段和linker-C-DDD基因重组为Fd-DDD,将其和Vκ分别克隆到真核表达载体中,共转染293Free style细胞,表达纯化该抗体。应用SDS-PAGE、Western blot、ELISA、免疫共沉淀、亲和力测定及免疫荧光试验检测该抗体的免疫学特性,用荧光抗体病毒中和试验检测其中和活性。结果:成功构建了全人源抗狂犬病毒二价抗体Fab094-DDD的真核表达载体,获得的二价Fab094-DDD抗体与抗原保持着较好的亲和力,能特异性结合狂犬病毒,中和效价为213.2 U/mg。结论:成功制备了抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体,具有较高的中和活性,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础,对于其他疾病双表位人源特异性抗体的制备也具有借鉴作用。

主 题 词：狂犬病毒 二价抗体 中和活性 双表位抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20160610

馆 藏 号：203172719...