抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测

作     者：戴丽娟 鄢成伟 李淑珍 陈莉 李新禹 单瑞辉 于学薇 唐晓波 

作者机构：哈尔滨医科大学附属第二医院药学部 哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江哈尔滨150081 

基　　金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2008RFXXS018) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2011年第27卷第8期

页      码：883-886页

摘      要：目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定。方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株。表达产物经Ni-NTA柱纯化,120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株。120 g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性。

主 题 词：双特异单链抗体 CD3 VEGFR2 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.006089

馆 藏 号：203172922...