人类胰岛素生长因子Ⅰ基因的合成、表达与纯化

作     者：高媛 余榕捷 洪岸 李志英 

作者机构：暨南大学生物工程研究所广东广州510632 

基　　金：广东省自然科学基金重点项目 (No .0 2 12 0 ) 广东省科技计划项目 (No .2 0 0 4A10 90 2 0 0 2 ) 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2005年第21卷第2期

页      码：260-265页

摘      要：目的 :实现含人类胰岛素生长因子I(hIGF - 1)融合蛋白的高水平可溶性表达和纯化 ,应用factorXa获得非融合的hIGF - 1,并对提高目的融合蛋白对factorXa的敏感性进行探索。方法 :根据大肠杆菌偏爱密码子设计并合成编码 70个氨基酸的hIGF - 1基因 ,克隆到表达载体pET - 35b(+) ,实现hIGF - 1与纤维素结合域 (cellulosebindingdomain ,CBD)的融合表达 ,并在两者之间引入factorXa的识别位点 ,同时尝试在factorXa识别位点前引入 7个氨基酸的柔性短肽 (Gly -Thr-Gly -Gly-Gly -Ser -Gly) ,比较factorXa酶切效率。纤维素亲和层析纯化融合蛋白CBD -IGF ,经Westernblotting检测后 ,利用MTT法测定其促进NIH3T3细胞增殖的活性。结果 :可溶性融合蛋白CBD-IGF在大肠杆菌中高效表达 ;活性测定结果显示所纯化的融合蛋白具有促进 3T3细胞增殖的活性。在factorXa识别位点前引入柔性短肽后提高了融合蛋白对factorXa的敏感性。结论 :实现有活性的融合蛋白CBD -IGF在大肠杆菌中可溶性的高效表达 ,为高效制备hIGF - 1基因工程产品奠定了基础。此外 ,在factorXa识别位点前引入柔性短肽有效提高融合蛋白CBD -IGF对factorXa的敏感性。

主 题 词：胰岛素样生长因子1 融合蛋白类 因子Xa 基因 基因表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100104[100104] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-4718.2005.02.012

馆 藏 号：203173421...