核酸纳米材料携带的mTOR小干扰RNA对肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的影响

作     者：杜鹃 尤再春 贺斌峰 王应明 杨俊俊 毛诚德 王关嵩 Du Juan;You Zaichun;He Binfeng;Wang Yingming;Yang Junjun;Mao Chengde;Wang Guansong

作者机构：第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所重庆400037 第三军医大学新桥医院急诊科重庆400037 Department of ChemistryPurdue University 

基　　金：国家自然科学基金(81429001) 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2016年第38卷第15期

页      码：1710-1716页

摘      要：目的研究自组装核酸纳米材料携带的mTOR小干扰RNA(self-assembled nucleic acid nanoparticles loaded mTOR small interfering RNA,siRNA-NPs)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary arterial smooth muscle cells,RPASMCs)自噬和增殖的影响。方法设计并合成DNA序列m T-2A、m T-1A3以及5 端标记Cy3的mTOR siRNA,共设计mTOR siRNA序列3条,选其中最佳序列,将上述核酸材料按照操作步骤自组装合成三角板型的核酸纳米材料。实验分4组:核酸纳米材料携带的mTOR siRNA组(siRNA-NPs组)、单纯纳米材料组(NPs组)、单独的siRNA组和空白对照组。各组材料分别转染RPASMCs 24 h,激光共聚焦显微镜观察RPASMCs对核酸纳米材料携带的mTOR siRNA的摄取情况;应用RT-PCR检测各组细胞中mTOR mRNA的表达水平,应用Western blot检测p-mTOR、LC3B蛋白的表达水平;激光共聚焦、透射电镜检测细胞自噬水平;MTT及3H-TdR检测各种材料处理后对细胞的生长的影响。结果激光共聚焦显微镜下可见siRNA-NPs组细胞质内均匀分布大量呈颗粒状的红色荧光物质,其荧光强度均显著高于单独的siRNA组(P<0.05);而且siRNA-NPs组处理的mTOR mRNA和p-mTOR蛋白表达显著低于单独的siRNA组、NPs组及空白对照组(P<0.05);而LC3B蛋白表达显著高于其他各组(P<0.05),激光共聚焦检测显示siRNA-NPs组标记自噬小体的绿色荧光明显强于单独的siRNA组、NPs组及空白对照组(P<0.05),电镜结果显示siRNA-NPs能明显诱导细胞自噬小体形成;MTT及3H-TdR检测siRNA-NPs和单独siRNA处理RPASMCs后明显抑制其生长,且siRNA-NPs组细胞生长抑制率又显著高于单独的siRNA组(P<0.01)。结论 siRNA-NPs能被RPASMCs有效摄取并明显抑制靶基因的表达,进而诱导细胞自噬并且抑制其细胞增殖。

主 题 词：核酸纳米材料 mTOR 小分子干扰RNA 肺动脉平滑肌细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100101[100101] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.16016/j.1000-5404.201511156

馆 藏 号：203173602...