狂犬病病毒核蛋白基因的克隆序列分析及其在***中的高效表达

作     者：高明华 夏咸柱 薛琳 GAO Ming-hua;XIA Xian-zhu;XUE Lin

作者机构：吉林大学畜牧兽医学院 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062 内蒙古扎兰屯农牧学院内蒙古扎兰屯162650 军事医学科学院军事兽医研究所 

基　　金：农业部重要人兽共患病(尼帕 西尼罗 狂犬病)防制技术平台(2004BA519A32-加强) 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2006年第42卷第11期

页      码：6-9页

摘      要：对狂犬病病毒(RV)ERA株核蛋白(N)基因进行了克隆和序列分析。根据GenBank中已发表的RVN基因序列,设计合成了1对特异性引物,对RVERA株N基因进行了RT-PCR扩增。将PCR产物纯化后与pMD18-T连接得到重组质粒pMD-N,并进行核苷酸序列测定。结果该基因全长1353bp,编码450个氨基酸。RVERA株与CVS-11、PV-11、SRV9和SAD-B19株相比,核苷酸的同源性分别为98%、98.3%、99%、99.6%,推导的氨基酸的同源性分别为98%、99%、99%、99.6%。将pMD-N双酶切,回收目的基因片段并克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建了重组质粒pET-N;将其转化表达菌BL21(DE3)并用IPTG进行诱导表达。结果重组菌裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为53kDa的重组蛋白,经凝胶薄层扫描分析,重组蛋白表达量占菌体蛋白的56.8%,Western-blot结果显示该重组蛋白能与RV多克隆抗体发生特异性反应。

主 题 词：狂犬病病毒 核蛋白基因 克隆 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0529-6005.2006.11.002

馆 藏 号：203173724...