应用PCR技术快速检测熊蜂短膜虫

作     者：张体银 刘蓓 郑腾 白泉阳 田国宁 王武军 张志灯 于师宇 

作者机构：福建出入境检验检疫局福建省检验检疫技术研究重点实验室福州350001 福建农林大学蜂学学院福州350002 潍坊出入境检验检疫局山东潍坊261041 

基　　金：国家质检总局科技计划项目(2014IK244) 福建省科技计划重点项目(2014N0001) 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2016年第59卷第6期

页      码：692-698页

摘      要：【目的】近年来,熊蜂作为温室作物的理想授粉者在国外已被广泛利用,并且获得很好的经济效益和生态效益,所以国外熊蜂经常被进口用于设施农业。熊蜂短膜虫Crithidia bombi是熊蜂的一种重要寄生虫病,一旦随进口熊蜂传入,将给国内熊蜂蜂群带来严重危害,因此迫切需要建立一种熊蜂短膜虫检测方法。【方法】基于熊蜂短膜虫基因内转录间隔区(internal transcribed space,ITS)基因序列设计了一对引物(Cri-F/R),建立了熊蜂短膜虫的PCR检测方法,并对退火温度、引物浓度和循环个数等反应条件进行了优化,同时验证了该PCR方法的灵敏性、特异性和稳定性。【结果】以熊蜂短膜虫ITS基因保守区设计特异性引物建立的熊蜂短膜虫PCR检测方法是可行的。优化的PCR反应条件为:退火温度59℃,引物浓度0.5μmol/L,扩增循环数35次。对感染熊蜂短膜虫的熊蜂总DNA的灵敏度达到13.24×10-5ng/μL,并具有良好的特异性和稳定性。将该方法应用于熊蜂短膜虫的检测,整个检测过程不超过4 h,具有良好的适用性。【结论】研究建立了熊蜂短膜虫检测方法,能用于疫情监测和进境熊蜂的检验检疫。

主 题 词：熊蜂短膜虫 PCR技术 内转录间隔区 熊蜂 检疫 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 

核心收录：

D　O　I：10.16380/j.kcxb.2016.06.013

馆 藏 号：203174044...