载体浓度和感受态对大分子载体转化效率的影响

作     者：覃鸿妮 张兰兰 QIN Hong-ni;ZHANG Lan-lan

作者机构：苏州工业园区服务外包职业学院江苏苏州215123 金唯智(苏州)生物科技有限公司江苏苏州215123 

基　　金：苏州工业园区服务外包职业学院教研教改研究课题(JG-201601) 

出 版 物：《安徽农业科学》 (Journal of Anhui Agricultural Sciences)

年 卷 期：2016年第44卷第17期

页      码：181-186页

摘      要：[目的]研究载体量和感受态对阳性克隆率的影响。[方法]利用引物拼接PCR技术,自行设计26条引物合成一个835 bp的目的基因,将该基因与约20 kb的大分子载体连接构成重组质粒。在1 500 ng目的基因底物量的基础上,设置50、100、150、200、250、300 ng 6个梯度载体量,得到的重组反应产物再转化入Top10F 、DH5α、Stbl3、Epi400、JM108、SCSI 6种不同的感受态中,组成36个试验组合。[结果]不同载体量阳性克隆率由大到小依次为200、250、300、150、100、50 ng,200 ng的阳性克隆率最高可达75%,平均达28.5%。不同感受态细胞阳性克隆率由大到小依次为Stbl3、Top10F 、DH5α、JM108、Epi400、SCSI,Stbl3在任何载体浓度下均高于其他感受态,平均阳性克隆率为42.4%。[结论]载体量和感受态均明显影响阳性克隆率,最佳组合为200 ng的载体分子量配合Stbl3感受态,阳性克隆率可达75%。

主 题 词：大分子载体 载体浓度 感受态 转化效率 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.17.060

馆 藏 号：203174045...