随机扩增多态性技术联合荧光定量PCR检测结核分枝杆菌方法的建立

作     者：严玉娟 邢益平 施旭东 严友德 艾月梅 刘雪 

作者机构：南京医科大学第一附属医院感染科江苏省210029 南京市胸科医院检验科 

基　　金：2011年江苏省医学创新团队基金项目(LJ201121) 

出 版 物：《江苏医药》 (Jiangsu Medical Journal)

年 卷 期：2016年第42卷第11期

页      码：1209-1213页

摘      要：目的结合随机扩增多态性技术(RAPD)和荧光定量聚合酶链式反应技术(qPCR)的优势,建立快速、准确地检测结核分枝杆菌的新方法。方法根据国内外文献设计随机引物,以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv为模板进行RAPD,产物进行琼脂糖凝胶电泳,选取条带进行割胶纯化测序,在美国国家生物技术信息中心(NCBI)的基本局部比对搜索工具(BLAST)程序上进行同源性检索,结果和结核分枝杆菌匹配率都达到99%。设计特异性内引物和探针,以RAPD产物为模板进行qPCR,并优化反应条件。分别以10倍梯度稀释的一系列浓度的H37Rv和其他阴性对照菌为模板,进行qPCR和RAPD-qPCR,分析其灵敏性和特异性。结果 qPCR能够检测到30pg/μl的结核分枝杆菌,而RAPD-qPCR灵敏性提高到3fg/μl。而且RAPD-qPCR检测30pg/μl至30fg/μl的结核分枝杆菌核酸时,扩增得到的Ct值都较小[(6.58±0.19)^(14.95±0.36)],结果稳定,易于判断。qPCR和RAPD-qPCR检测其他临床常见的细菌均呈现阴性。结论 RAPD-qPCR是一种快速、准确地检测出结核分枝杆菌的新方法。

主 题 词：结核分枝杆菌 随机扩增多态性技术 荧光定量聚合酶链式反应 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.19460/j.cnki.0253-3685.2016.11.001

馆 藏 号：203175143...