牦牛星状病毒的RT-PCR检测方法的建立和变异分析

作     者：陈曦 汤承 张斌 宋志刚 周芳 岳华 CHEN Xi;TANG Cheng;ZHANG Bin;SONG Zhi-gang;ZHOU Fang;YUE Hua

作者机构：西南民族大学生命科学与技术学院成都610041 

基　　金："十二五"高技术研究发展计划(863计划)课题(2012AA101304) 四川省科技计划项目青年基金(2014JQ0044) 四川省教育厅创新团队(13TD0057) 西南民族大学研究生创新型科研项目(CX2015SZ067) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2016年第47卷第6期

页      码：1287-1292页

摘      要：近期作者实验室从腹泻牦牛粪便样本中鉴定出一种新型星状病毒(AstV)——牦牛AstV,本研究旨在建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。首先设计引物扩增牦牛AstV 630bp的ORF2基因片段,进行序列分析;在此基础上设计检测引物,建立检测牦牛AstV的RT-PCR方法。结果显示,从20份牦牛腹泻粪便中扩增出13个牦牛AstVORF2基因片段,核苷酸相似性为99.3%~100%,而与牛肠源星状病毒(BAstV)ORF2基因的相似性仅为59.5%~80.8%;所建立的RT-PCR方法只扩增牦牛AstV的特异片段,对BAstV和其他无关病原无扩增;对病毒核酸的最低检测限为57.3fg·μL^(-1);比较试验表明,所建立的RT-PCR方法对牦牛AstV的检出率明显优于现有检测BAstV的RT-PCR方法。其对牦牛腹泻与健康粪便样本中牦牛AstV的检出率分别为55.5%(76/137)和7.7%(2/26)(P<0.01)。试验结果表明,扩增的ORF2基因片段的核苷酸序列在牦牛AstV毒株间高度保守,但相对于BAstV变异大;基于该序列建立的检测牦牛AstV的RT-PCR方法特异性好,灵敏度高,稳定性好,为牦牛AstV的检测和流行病学调查提供了有力工具;同时,本试验结果也提示牦牛AstV与犊牦牛腹泻有联系。

主 题 词：牦牛 星状病毒 RT-PCR ORF2基因 遗传变异 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2016.06.027

馆 藏 号：203176243...