人类免疫缺陷病毒-1vpr基因干扰RNA载体构建及筛选的体外研究

作     者：黄娜 张权 何艳 周泉 龚国忠 郑煜煌 肖新强 许振宇 

作者机构：中南大学湘雅二医院感染科长沙410011 

基　　金：湖南省科学技术厅计划项目(2014SK3097) 湖南省发改委科研计划项目(2015-83) 

出 版 物：《中华传染病杂志》 (Chinese Journal of Infectious Diseases)

年 卷 期：2016年第34卷第7期

页      码：400-403页

摘      要：目的筛选鉴定针对HIV-1vpr基因的小干扰RNA（siRNA）干扰片段，探讨siRNA对HIV-1vpr基因的干扰效率。方法根据siRNA设计要求合成针对HIV-1vpr靶点的2段寡核苷酸片段，并构建相应载体，转染含HIV-1vpr质粒的HEK293T细胞。设2个实验组（siRNA56、siRNA160组），1个阴性对照组（NC组），空白HEK293T细胞为对照组（Con组）。各组分别进行总RNA、蛋白提取，实时PCR和蛋白质印迹分别从核酸和蛋白水平验证有效的靶向HIV-1vpr的siRNA片段。ELISA检测各组培养细胞上清液中IL-17、丫干扰素水平。结果DNA测序结果表明成功构建了哺乳动物细胞pRNAT—U6．1／Neo—Vpr-56／160（siRNA56和***160）表达载体。siRNA56和siRNAl60干扰使HIV1vpr基因在mRNA水平的表达分别下降69．0％和76．1％；在蛋白表达水平分别下降76．3％和86．5％。Con组、NC组、siRNA56组和siRNA160组细胞培养上清液中IL-17分别为（1．936±0．415）、（1．815±0．393）、（1．935±0．356）和（2．03±0．421）pg／mL；了干扰素分别为（1．673±0．234）、（1．648±0．332）、（2．169±0．362）和（2．301±0．4125）pg／mL。结论表达pRNAT—U6．1／Neo—vpr-56／160（sirNA56和siRNA160）的质粒构建成功，针对不同基因片段的siRNA均可以下调HIV-1vpr的表达水平。

主 题 词：人类免疫缺陷病毒1 基因,vpr RNA干扰 白细胞介素17 干扰素Ⅱ型 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2016.07.003

馆 藏 号：203176909...